漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒
【産品名稱】
商品名稱:漢坦病毒通用型(HTV-U)檢測試劑盒(熒光 PCR 法)
Name : Hantavirus Detection Kit(Real-Time PCR Method)
【包裝規格】50T/盒
【預期用途】
漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒适用于檢測病患血液、尿液及病變組織中的漢坦病毒 RNA,适用于漢坦病毒感染的輔助診斷。 【檢驗原理】
本試劑盒對漢坦病毒基因組保守區設計特異性的引物和探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對漢坦病毒 RNA進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
注:
1)不同批号試劑不能混用。
2)試劑盒内各試劑組份足夠包裝規格所标示的檢測次數。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反複凍融次數不超過5 次,有效期12 個月。
【适用儀器】
ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。
【标本采集】
抽取全血5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,或采集患者尿液、病變組織。
【保存和運輸】
上述标本短期内可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6 個月,标本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反複凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理
血液:直接取100μL 于滅菌離心管中或取血清100ul 于滅菌離心管中
尿液:取100μL 于滅菌離心管中;
組織樣品:稱取組織樣品約 0.5g,置于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水後繼續研磨,勻漿後取 100μL
于1.5mL 滅菌離心管中;
1.2 核酸提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生産的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區)
根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應管數每滿10 份,多配制1 份),每測試反應體系配制如下表:
将混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,21uL/管。
3. 加樣(樣本處理區)
将步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分别加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1 将待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽内;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX
選擇 None 即可。
4.3 推薦循環參數設置:
. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定
設置Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析後圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 範圍内調節)、stop 值(一般可在 5~20 範圍内調節),以及 Threshold 的Value 值(上下拖動阈值線至高于陰性對照),重新分析結果。
.2 結果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道 35陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6. 質控标準
陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且Ct 值≤32;
以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
【生産企業】
企業名稱:上海晅科生物科技有限公司