甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

【産品名稱】

商品名稱：甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品

Name ：Avian Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】50T/盒

【預期用途】

甲型流感是由甲型流感病毒(AIV)引起的一種禽類傳染病，雞、火雞、鴨和鹌鹑等家禽均可感染，發病情況

差别較大，有的出現急性死亡，有的無症狀帶毒。水禽是 AIV 的自然宿主，也是流感病毒的天然基因庫，幾乎

所有亞型的流感病毒都可以在水禽中分離到[1]。在世界範圍内，家禽中流行的主要有 H5、H6、H7、H9 等亞型。

H5 和 H7 亞型的某些毒株可以造成禽類很高的發病率和死亡率，被稱為高緻病性甲型流感(HPAI)病毒。OIE 将

高緻病性甲型流感列為 A 類動物疫病，我國也将其列為一類動物疫病[2-3]。

本試劑盒利用實時熒光 PCR 原理，檢測甲型流感病毒，對甲型流感診斷有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對甲型流感病毒 M 基因高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含甲型流感病毒基

因組模闆的情況下，PCR 反應得以進行并釋放熒光信号。利用儀器對 PCR 過程中相應通道的信号強度進行實時

監測和輸出，實現檢測結果的定性、定量分析。

【試劑組成】

注：1）不同批号試劑不能混用。

2）試劑盒内各試劑組份足夠包裝規格所标示的檢測次數。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反複凍融次數不超過5 次，有效期12 個月。

【适用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。

【标本采集】

病死或撲殺動物，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活動物，用棉拭子取呼吸道分泌物或排洩

物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述标本短期内可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，标本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，

嚴禁反複凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

每份組織分别從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術剪剪碎混勻後取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生

理鹽水後繼續研磨，待勻漿後轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離

心管中；棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生産的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提

取，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數

每滿10 份，多配制1 份)，每測試反應體系配制如下表：

将混合好的測試反應液分裝到PCR 反應管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區）

将步驟1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分别加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，

短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1 将待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽内；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇ROX 參比熒光，

選擇None 即可。

4.3 推薦循環參數設置：

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置Baseline 和Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析後圖像

調節Baseline 的start 值(一般可在3~15 範圍内調節)、stop 值(一般可在5~20 範圍内調節)，以及Threshold 的

Value 值(上下拖動阈值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性：檢測通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道35<Ct 值≤38，建議重複檢測，如果檢測通道仍為35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，

判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果Ct 值>38 或無Ct 值。

6. 質控标準

陰性質控品：Ct>38 或無Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct 值≤32；以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

3.陽性對照、擴增産物洩漏，會導緻假陽性結果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導緻假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導緻假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準确引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準确的結果；

7.本檢測結果僅供參考，如須确診請結合臨床症狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒内各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢後用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作台和移液器；

8.試劑盒裡所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

【參考文獻】

[1] Webster R G, Bean W J, Gorman O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J]. Microbiological

Reviews, 1992, 56(1): 152-179.

[2] Shortridge K. Avian influenza A viruses of southern China and Hong Kong: ecological aspects and implications for

man [J]. Bulletin of the World Health Organization, 1982, 60(1): 129.

[3] 張烨, 舒躍龍. 2004–2012 年我國甲型流感流行情況 [J]. 中華實驗和臨床病毒學雜志, 2013, 27(3): 239-240.【生

産企業】

企業名稱：上海晅科生物科技有限公司