elisa酶聯免疫試劑盒-禽呼腸孤抗體檢測

禽呼腸孤抗體檢測-elisa酶聯免疫試劑盒使用說明書

【用途】

用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體

【試驗原理】

禽呼腸孤病毒被認為與病毒性關節炎、發育遲緩綜合征、呼吸系統疾病、腸熱病、吸收障礙綜合症和骨質疏松有關，從未發病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發疾病的的性質、症狀和嚴重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用方法進行監測。

将滅活的抗原包被在微孔闆上，加入稀釋後的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體将與微孔闆上的REO抗原結合并形成REO抗原抗體複合物，然後洗掉未結合的物質，加入堿性磷酸酶标記的抗雞的（結合物）至微孔闆中，結合物将與抗原抗體複合物結合，孵育後洗掉未結合的結合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發生反應形成黃色的物質。後，終止反應，将顔色固定。顔色的深淺可用酶标儀（405-410nm）測定。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

1.2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個月。

2.包被闆開封後2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【适用儀器】

含450nm和630nm波長酶标儀；37℃恒溫設備；可調微量移液器。

【樣本要求】

1. 為取得實驗效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴重溶血的樣品；

2.短期（7天）将進行檢測的血清樣品可存放于2～8℃；如需長期保存，應置于-20℃或以下，避免反複凍融。

【檢驗方法】

1. 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水将濃縮洗滌液（2号液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。

2.樣本稀釋：用樣本稀釋液（5号液）将待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3.加樣反應：每次試驗設陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分别加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應30分鐘。甩去孔内液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；後一次甩淨，拍幹。

4.加酶反應：除空白對照孔外，其餘每孔加酶結合物（1号液）1滴，37℃避光反應30分鐘。甩去孔内液體，如上洗滌，拍幹。

5.顯色反應：加底物（3号液）和顯色劑（4号液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。

6.終止反應： 加終止液（6号液）1滴，以空白對照調零，用酶标儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。

【參考值】

1.Cut-off 值 (COV)=陰性對照平均OD值×2.1 (陰性對照孔OD值＜0.08時按0.08計)。

2.有效性判定：

空白對照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實驗無效）；

陰性對照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實驗無效）；

陽性對照孔OD值≥0.30（若小于0.30則實驗無效）。

【檢驗結果的解釋】

樣本OD值≥COV值時，判為病毒抗體陽性；

樣本OD值＜COV值時，判為病毒抗體陰性。                        

【檢驗方法的局限性】本試劑僅适用于檢測鴨血清。

【禽呼腸孤抗體檢測-elisa酶聯免疫試劑盒注意事項】

1.包被闆須密封防潮。從冷藏環境中取出時，應平衡至室溫後，方可開封啟用。未使用完的闆條應即時放回有幹燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加試劑前應将滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應保持豎直。

3.瓶蓋每次使用後要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批号試劑盒的試劑組份不可混用。

4.孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱内使用。

5.用棄的試劑盒及樣本都應按污染物妥善處理。試劑盒内終止液有腐蝕性，須小心使用。